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PCR仪的工作原理
点击次数:1033 发布时间:2018-09-18

PCR 扩增的步骤

首先将模板 DNA 置于 92℃ -96℃,进行变性(denaturation)处理,使 dsDNA 在高温下解链成为 ssDNA ,且热变性不改变其化学性质;然后退火(annealing) ,将温度降至 37℃ -72℃,使引物与模板的互补区相结合;zui后,在 72℃ 条件下, DNA 聚合酶将 dNTP 连续加到引物的 3'-OH 端,合成 DNA ,这个步骤称为延伸(extension)。这三个热反应过程的重复称为一个循环,经过 20-40 个循环可扩增得到大量位于两条引物之间序列的 DNA 片段。

基本要素与DNA复制的基本要素是一致的。待拷贝的 DNA 称为模板,它可以是双链 DNA 也可是单链DNA,zui后扩增得到的产物是双链状态的。引物是 DNA 复制的先锋,就象结晶过程中的晶核,引导 DNA 的合成。在 PCR 扩增中一般使用合成的寡核苷酸作引物。DNA 聚合酶是 DNA 复制的动力,在 dNTP 等底物存在时在引物的引导下沿着模板 DNA 合成互补的 DNA 链。

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